Entwodiksyon de baz
Erythrocyte lysate se youn nan metòd ki pi senp ak pi fasil pou retire globil wouj yo, se sa ki, fann globil wouj yo ak lisat, ki pa domaje selil nuklee yo epi yo ka konplètman retire globil wouj yo. Lysate klivaj se yon metòd pou retire globil wouj ki twò grav, ki se sitou itilize pou separasyon ak pirifye selil tisi ki gaye nan dijesyon anzim, separasyon ak pirifikasyon lenfosit, ak retire globil wouj nan eksperyans yo nan pwoteyin tisi ak nikleyè. ekstraksyon asid. Selil tisi yo jwenn nan lysate globil wouj yo pa gen globil wouj, epi yo ka itilize plis pou kilti prensipal, fizyon selil, sikometri koule, separasyon ak ekstraksyon asid nikleyik ak pwoteyin, elatriye.
Enstriksyon pou itilize
Echantiyon selil tisi
1. Tisi fre yo te dijere pa pankreyas / anzim oswa kolagenaz ak dispèse nan sispansyon sèl selil, ak supernatant la te jete pa santrifujasyon.
2. Pran ELS lysate nan frijidè a nan 4â, ajoute ELS lysate nan selil presipite nan yon rapò 1:3-5 (ajoute 3-5ml lysate a 1ml selil konpakte), dousman soufle epi melanje.
3. Santrifije nan 800-1000rpm pou 5-8 minit epi jete anwo likid wouj klè.
4. Yo te kolekte pati a presipite ak santrifuje ak solisyon Hank la oswa solisyon kilti san serom pou 2-3 fwa.
5, si fann nan pa konplè / konplè ka repete etap 2 ak 3.
6. Selil resuspension pou eksperyans ki vin apre yo; Si yo ekstrè RNA, li pi bon pou fè sa nan solisyon ki prepare nan Etap 4 la lè l sèvi avèk dlo DEPC
Selil wouj nan san gen yon sik lavi trè kout, sèlman 120 jou, men yo repwodui san trè vit, ak nan ka sa a yo patikilyèman kapab nan divizyon selilè, epi yo se selil ki divize pi rapid nan tout, kidonk selil sa a gen anpil valè, kidonk li trè itil pou kilti selil. Li trè senp, li pa gen okenn òganèl ladan l, jis manbràn selilè ak pwoteyin.